您的当前位置: vns85978威尼斯城官网 >> 行业新闻
   
分类:
名称:
·低速离心机
·高速离心机
·高速冷冻离心机
·低速大容量冷冻离心机
·脱帽离心机
·血库离心机
·涂片离心机
·迷你离心机
·美容离心机
·毛细管离心机
·石油离心机
·细胞离心机
·血型卡离心机
·进口离心机
·微孔板离心机
 
  
    

淋巴细胞的分离技术

 

淋巴细胞的分离技术

(一)材料与试剂
    1.淋巴细胞分层液有两种:
 (1)聚蔗糖—泛影葡胺液:聚蔗糖(polysucrose solution),商品名Ficoll,分子量400 000,多配制成40±1%(W/V)水溶液,也有干粉出售。应用时,用蒸馏水配制9%溶液。泛影葡胺溶液(Meglumini diatrizoici),商品名Vrografin,结构式为3,5—二乙酰氨基2,4,6三碘苯甲酸1—去氧—甲氨基山梨醇。含量为60%或75%,每安瓶为20ml装,常用于人的脏器造影。应用时,取60%泛影葡胺原液20ml,加双蒸馏水15.38ml,即为33.9%泛影葡胺。
 
1.077±0.001聚蔗糖—泛影葡胺的配制:
9%聚蔗糖液                 24份
33.9%泛影葡胺液            10份
混合即可。必要时,可测比重。需要备用,可用G
混合即可。必要时,可测比重。需要备用,可用G5漏斗过滤除菌或114.3℃高压灭菌15min,4℃保存。一般可保存3个月。
如要配制不同比例的分层液,可按下列公式计算:
式中dm为分层液的比重,d1和d2分别为9%聚蔗糖和33.9%泛影葡胺的比重,V1和V2分别为它们的体积。如需配制1.077比重的聚蔗糖—泛影葡胺的分层液,则9%的聚蔗糖和33.9%的泛影葡胺的比例应为100︰46.3。
(2)泛影葡胺—右旋糖酐(dextran)液
  34%泛影葡胺液               10份
  60%右旋糖酐液               12.5份
混合,即为比重1.07~1.09的分层液。分装于棕色瓶中,4℃冰箱保存备用。
2. 3%的明胶液  称取明胶3g,溶于0.9%的灭菌生理盐水,终体积100ml,114.3℃高压灭菌10min,冷却后4℃冰箱保存,临用时37℃预热10min。
3.Hank’s液。
(二)操作方法
1.取抗凝血,自然沉降,如是马属动物的血液,可直接直立试管架上,让其自然沉降1h,取上层血浆。如是牛、羊血液,由于其血沉速度非常慢,可加等量3%明胶液,混匀后让其自然沉降,1h后取上层血浆。
2.2 000r/min离心10min,弃上清。
3.沉淀用Hank’s液混悬后,再2 000r/min离心10min。
4.重复步骤3一次,再用细胞营养液将白细胞制成悬液。此液含有整个白细胞群,包括粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和部分红细胞。可供白细胞计数用。
5.取2ml细胞分层液于离心管内,同时用毛细吸管吸取约2ml的血浆(自然沉降1h的上层血浆)轻轻加入分层液上,直接加抗凝血也可。
6.以水平转子离心机2 000r/min离心20min。离心后,可见分成多层,最下层是红细胞,中间层是分层液,最上层是血浆。在血浆层与分层液之间是一薄层较致密的白色层,即为单个核细胞层。
7.用毛细吸管插入到单个核细胞层并吸取该层,放入另一试管中。
8.以Hank’s液洗涤、离心,最后配制成适当的白细胞浓度。必要时可计数。
(三)注意事项
1.血浆或血液加入分层液中时要小心,缓慢不要打乱液层、不要摇动。也可以将分层液加入到血浆的上层。
2.保持淋巴细胞的活性是非常重要的,所以一般情况下,是现采血,马上进行分离。
3.经过分层液分离的淋巴细胞层,实际上是单个核细胞层,包括单核细胞,不包括粒细胞。欲分离出纯的淋巴细胞,则按下法除去单核细胞,或收获单核细胞。

 

版权所有 2006 vns85978威尼斯城官网-澳门网站大全平台网址 京ICP备12017419号
Copyright © 2006 SINA Corporation, All Rights Reserved 京ICP备12017419号
销售热线 010-51129985 010-63861691 400-0022-950 售后热线:010-63861876
Email:guo51129985@126.com   通用网址:/
热点产品:离心机,高速离心机,冷冻离心机,高速冷冻离心机,台式高速冷冻离心机,低速离心机大容量冷冻离心机,大容量离心机
XML 地图 | Sitemap 地图